支原體污染

細胞實驗是生命科學研究中重要的工具，它們?yōu)榭茖W家提供了深入了解細胞行為、分子機制以及疾病發(fā)展的機會。

細胞實驗的可靠性和可重復性是科學研究的基石。支原體污染是阻礙實驗結果準確和可靠的原因之一。支原體是一類細小的微生物，它們可以感染人類和動物細胞，對細胞實驗的結果產(chǎn)生嚴重影響，引發(fā)了廣泛的關注。

本期內(nèi)容，來講講細胞實驗中，已報道過的支原體危害。

影響細胞脂類代謝

研究人員以不同濃度的肺炎支原體處理人肺癌上皮細胞，不同時間后提取胞膜及表面的鞘脂類，應用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時間質(zhì)譜一 進行分析應用RT-PCR和免疫熒光方法，檢測鞘脂類代謝通路中兩個關鍵酶的變化。

實驗結果：

肺炎支原體和細胞大多數(shù)鞘脂類組成成分相同；感染能影響細胞的鞘脂類代謝，包括誘導新種類的神經(jīng)酞胺的生成， 升高或降低某些神經(jīng)酞胺的濃度，在一定濃度和時間點能誘導酸性鞘磷脂酶的聚簇和絲氨酸棕擱酞轉移酶的變化。

對黑色素瘤細胞的影響

在研究早期傳代黑色素瘤細胞系中的干細胞樣特性時，研究人員注意到感染了豬鼻支原體的細胞系的實驗組的可重復性差。

研究人員用支原體感染其他黑色素瘤細胞系.研究發(fā)現(xiàn)，支原體感染在培養(yǎng)中會產(chǎn)生多形性效應，從細胞凋亡到增強的致瘤性和侵襲性，并且會造成相當大的資源浪費和實驗結果解釋的混亂[2]。

誘導細胞產(chǎn)生炎癥因子

在一項研究中，研究人員利用肺炎支原體感染A549細胞。

研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體能刺激A549細胞分泌TNF-α, 其產(chǎn)生水平與刺激時間具有量的正相關性；肺炎支原體還能刺激A549細胞分泌IL-8, 其產(chǎn)生水平與刺激時間亦具有量的正相關性。而被支原體感染的A549細胞分泌TNF-α和IL-8可能與NF-κB的激活有關。

誘導細胞氧化應激

在這項研究中，研究人員利用多巴胺能神經(jīng)元細胞系(BE-M17)，使用單細胞凝膠電泳(彗星試驗)，來評估支原體感染對基因組不穩(wěn)定性和堿基切除修復(BER)活性的影響。

結果表明，與未感染的細胞相比，支原體感染在沒有炎癥反應的情況下誘導氧化應激，DNA損傷水平(鏈斷裂/堿不穩(wěn)定位點(SB/ALS)和氧化嘌呤)顯著增加。未感染細胞修復SB/ALS的速度比感染細胞更快。未感染的細胞在24小時內(nèi)就能修復氧化嘌呤，而感染的細胞在30小時后也不能修復。

總之，本研究表明，支原體感染不僅會誘導氧化應激和DNA損傷，而且還會降低負責氧化損傷DNA修復的主要途徑，即BER的效率

[1]郁園園. 肺炎支原體感染干擾人肺癌上皮細胞A549的脂類代謝[D],2008.

[2]Ji Y, Karbaschi M, Cooke MS. Mycoplasma infection of cultured cells induces oxidative stress and attenuates cellular base excision repair activity. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2019;845:403054. doi:10.1016/j.mrgentox.2019.05.010

[3]肺炎支原體誘導A549細胞分泌腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-8的相關性[J],2009,30(02):188-190+194.

預防實驗室中的支原體污染

由于支原體感染細胞，會帶來一系列難以預測的生理生化反應，影響實驗結果，因此，在日常的實驗中，要注意預防支原體污染的發(fā)生。

除了常規(guī)的實驗室清潔外，建議使用專業(yè)的支原體清除、預防試劑——德國Minerva Biolabs公司的支原體祛除噴霧劑：Mycoplasma-off™，水槽支原體預防試劑：Water Shield™。 

Mycoplasma-off™

Mycoplasma-off™特點：

（1）快速有效

Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑即用型中含有支原體殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。   

（2）廣譜抗菌

不僅能清除并預防支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

（3）無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無腐蝕性和致癌性成分。

（4）操作簡便

即用型消毒液，可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

Mycoplasma-off™使用方法及步驟：

（1）將Mycoplasma-off™均勻噴于待消毒的潔凈臺或實驗設備和器材的表面。

（2）等待5-10分鐘。

（3）用干燥紙巾將已噴過Mycoplasma-off™的潔凈臺或實驗設備和器材的表面搽拭干凈。

（4）將已消毒的潔凈臺通風2-3分鐘，或將已消毒的實驗設備和器材置于通風處2-3分鐘。

（5）將剩余的Mycoplasma-off™噴霧劑置于陰涼通風處保存。

Water Shield™

細胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽，水浴鍋經(jīng)常會有支原體以及各種細菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時，水槽中的水源即會成為細胞污染的重要來源。

Water Shield™可持續(xù)作用四周，預防水源中的支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。

Water Shield™特點：

（1）長效。Water Shield™含表面活性劑、季銨鹽和絡合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周。

（2）安全。不含醛類或疊氮化物，對細胞無毒害。

（3）廣譜。預防支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子污染。

（4）方便。Water Shield™按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

（5）不產(chǎn)生水垢。

Water Shield™使用方法及步驟：

（1）Water Shield™和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

（2）Water Shield™按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5mlWater Shield™或10L蒸餾水+50mlWater Shield™。

（3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield™。