支原體是真正的細菌，但它們沒有細胞壁，因此與“經(jīng)典”細菌相比，它們的多形性更高。 由于支原體在細胞形態(tài)上具有可塑性，并且細胞尺寸較小，因此甚至可通過0.1μm的濾器。 這也是為什么它們作為細胞培養(yǎng)衍生的生物制劑的潛在污染物而受到關注的原因之一，尤其是當生物反應器為支原體生長提供有利條件時。支原體在人、動物、植物和昆蟲中普遍存在，因此，在生物制藥過程中使用的任何動植物來源原料都可能含有支原體。 另一方面，某些支原體通過生物膜可以在環(huán)境中長期生存。

支原體檢查是生物制藥生產(chǎn)過程中質(zhì)量控制（QC）的重要組成部分。但是，通過藥典規(guī)定的傳統(tǒng)培養(yǎng)方法檢查支原體有時會帶來重大挑戰(zhàn)。這些挑戰(zhàn)包括：

1. 支原體很小，顯微鏡下不可見。

2. 支原體物種很多，有一百多種。

3. 支原體有特殊的營養(yǎng)需求，有些不可培養(yǎng)。

4.  有些支原體只產(chǎn)生輕度的濁度變化，肉眼不易辨別。

因此，少量的支原體污染可能在很長一段時間內(nèi)都不會被發(fā)現(xiàn)，而災難性的后果則是生產(chǎn)時間的浪費和相當大部分的收入損失。

在細胞研究領域，支原體也是臭名昭著的污染源，許多實驗室都深受其害。早在1993年的研究顯示，美國FDA實驗室的兩萬個Hela細胞培養(yǎng)物中有15%受到了支原體的污染。現(xiàn)在，供應細胞和試劑的公司都會進行非常嚴格的支原體篩查。

又有人曾獲得了九千多份樣本的RNA測序數(shù)據(jù)，這些樣本來自于2012年-2013年間哺乳動物細胞的基因表達研究。他們在測序數(shù)據(jù)中尋找支原體DNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)11%的樣本都受到了支原體的污染。支原體DNA水平gao的一些研究，曾發(fā)表在一些頂jian期刊上。雖然支原體污染并不一定意味著這些研究結(jié)果無效，但這種微生物會影響數(shù)百個基因的表達，并與細胞競爭營養(yǎng)阻礙細胞的生長。在其中一組受污染的數(shù)據(jù)中（淋巴瘤細胞），也有人鑒定出61個被支原體改變的基因。據(jù)估計，在上世紀九十年代，支原體污染率是四分之一。

近一直在開發(fā)和實施的用于快速支原體檢測的核酸擴增技術(shù)（NAT） 已越來越受到重視。驗證后的方法可成為用于過程控制和批次放行檢測的預警系統(tǒng)。由于它們的巨大優(yōu)勢，預計它們將在將來越來越多地用于代替?zhèn)鹘y(tǒng)的培養(yǎng)方法進行支原體檢測。這可能會*改變生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)的質(zhì)量控制和批次放行方案。

目前，市面上已有多個品牌的支原體PCR和qPCR檢測試劑盒，有用于細胞支原體篩查的，也有可用于制藥企業(yè)放行檢測的。需要指出的是，用于制藥企業(yè)的PCR或qPCR方法需要進行方法驗證，可使用一些國外提供的標定好的支原體菌株（10CFU^TM支原體標準品）和支原體基因組DNA（拷貝數(shù)已經(jīng)標定）。它大大方便了NAT方法的驗證過程，為NAT替代傳統(tǒng)藥典方法提供了依據(jù)。

另需注意：按照國外藥典，支原體菌株和樣品需經(jīng)支原體DNA抽提后，才能進行PCR檢測。因此，選擇合適的支原體DNA提取試劑盒也是需要考慮的因素。

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