近年來隨著生物技術(shù)的發(fā)展，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已從簡(jiǎn)單的試驗(yàn)研究拓展到了生物學(xué)研究和商業(yè)應(yīng)用領(lǐng)域。生物制品如生物基因工程疫苗、病毒性疫苗、醫(yī)學(xué)治療性抗體的研究與生產(chǎn)都用到了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。應(yīng)用較廣泛較安全的動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)是Vero細(xì)胞。Vero細(xì)胞是世界衛(wèi)生組織(WHO)和《中國(guó)藥典》認(rèn)可的疫苗生產(chǎn)細(xì)胞系。

Vero細(xì)胞(非洲綠猴腎細(xì)胞)是日本學(xué)者Yasumura和Kawakita兩人在1962年正式從非洲綠猴腎臟分離的，初次用于生產(chǎn)人用生物制品的異倍體貼附依賴性細(xì)胞，并建立了細(xì)胞系和不同代次的細(xì)胞庫。在此之前，對(duì)生物制品的研究和生產(chǎn)只允許用原代細(xì)胞或二倍體細(xì)胞。

二倍體細(xì)胞系傳代次數(shù)有限，當(dāng)傳代達(dá)到一定代次后就會(huì)衰老凋亡，致使生產(chǎn)工藝無法投入到規(guī)模化生產(chǎn)。長(zhǎng)久以來，人們對(duì)將傳代細(xì)胞作為生物制品生產(chǎn)基質(zhì)的考慮和應(yīng)用很少，因檢測(cè)手段有限，對(duì)其致瘤性和外源性污染等特性研究不清楚，直到1987年，WHO才正式批準(zhǔn)傳代細(xì)胞系作為生物制品生產(chǎn)的基質(zhì)。

Vero細(xì)胞被批準(zhǔn)用于人用疫苗的生產(chǎn)后，開始生產(chǎn)的人用疫苗是Barrett等[1]生產(chǎn)的脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗(IPV)，之后Vero細(xì)胞用于狂犬病毒疫苗和口服脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗(OPV)等多種人用疫苗生產(chǎn)。Vero細(xì)胞在病毒性疫苗生產(chǎn)的應(yīng)用已有30年之久，尤其是狂犬病毒疫苗和脊髓灰質(zhì)炎疫苗。

Vero細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于人用疫苗的生產(chǎn)是基于其*的特性。Vero細(xì)胞因其固有的基因缺陷，不能表達(dá)抗病毒蛋白干擾素。Barrett等[1]試圖用新城疫病毒、仙臺(tái)病毒、風(fēng)疹病毒感染Vero細(xì)胞生產(chǎn)干擾素，結(jié)果表明Vero細(xì)胞不能表達(dá)分泌干擾素蛋白。然而，在相同條件下，改用BSC-1細(xì)胞和其他靈長(zhǎng)類動(dòng)物細(xì)胞重復(fù)這一實(shí)驗(yàn)時(shí)，這些細(xì)胞系可以表達(dá)分泌大量干擾素蛋白。有文獻(xiàn)報(bào)道，Vero細(xì)胞可能存在β和α基因的缺陷，不能表達(dá)干擾素蛋白[2]。Vero細(xì)胞的廣泛易感特性促進(jìn)了使用Vero細(xì)胞生產(chǎn)疫苗事業(yè)的發(fā)展。

除了以上優(yōu)勢(shì)，與生產(chǎn)生物制品生產(chǎn)用原代細(xì)胞系和二倍體細(xì)胞系相比，Vero細(xì)胞還具有以下優(yōu)勢(shì)：

一、來源方便，容易建立細(xì)胞庫和保存，可連續(xù)傳代，生長(zhǎng)速度快；

二、Vero細(xì)胞遺傳性狀穩(wěn)定，惡性化概率小，無外源性污染，具有良好的生物安全特性；

三、Vero細(xì)胞對(duì)多種病毒敏感，生產(chǎn)的病毒滴度高；

四、Vero細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)條件要求不高，在微載體表面能良好的貼附生長(zhǎng)，易在生物反應(yīng)器放大培養(yǎng)。

培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到疫苗的品質(zhì)。目前用于Vero細(xì)胞的培養(yǎng)基主要有M199、MEM、DMEM等合成培養(yǎng)基。近有報(bào)道，HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE 199培養(yǎng)基（SFRE 199是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基M199的基礎(chǔ)上改良的）也可用于Vero細(xì)胞的無血清培養(yǎng)[3]。如下圖所示，分別用添加水解乳蛋白的F-12和SFRE 199-1培養(yǎng)Vero細(xì)胞，結(jié)果顯示Vero細(xì)胞在無血清的SFRE199-1中生長(zhǎng)狀態(tài)良好。

參考文獻(xiàn)

［1］ Barrett PN，Mundt W，Kistner O，et al． Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based virul vaccines［J］． Expert Ｒev Vaccines，2009，8(5) ，607-618．

［2］ 吳雪伶，袁寶珠． 干擾素系統(tǒng)的完整性與 Vero 細(xì)胞病毒敏感性的相關(guān)性［C］/ /2012 年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集． 北京: 中國(guó)藥學(xué)會(huì)，2012．

［3］ Jack Litwin.The growth of Vero cells in suspension as cell-aggregates in serum-free media. State Bacteriology Laboratory, 105 21 Stockholm, Sweden.

締一生物作為HiMedia公司在中國(guó)的代理商，在細(xì)胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)及檢測(cè)領(lǐng)域，一如既往地為您帶來的服務(wù)。